Что такое ПЦР анализ и вирусная нагрузка?

Чтобы выяснить, сталкивались ли вы когда-нибудь с человеком, болеющим гепатитом, достаточно провести анализ крови на гепатит.

Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

Почему необходим анализ ПЦР при подозрении на гепатит С, что это такое?

Вирус гепатита С – РНК содержащий вирус, имеет 6 генотипов и до 500 субтипов. Из всех гепатитов этот вирус обладает самой высокой мутационной способностью и преодолевает защитный барьер иммунной системы. Из общего числа заболевших гепатитами, вирус С стал причиной 70% случаев хронической формы и 30% цирроза и рака печени.

Для справки! Диагностика гепатита С, опасного вирусного заболевания печени, стала возможной после внедрения в клиническую практику анализов с помощью ПЦР. До этого времени вирус оставался «невидимым» для исследователей, не реагируя на обычные методы определения инфекции.

Анализ ПЦР на гепатит – что это и зачем делают?

Суть способа: часть исследуемого гена с помощью специальных ферментов и условий заставляют размножаться в пробирке. Анализ ПЦР позволяет определить штамм вируса, без которого невозможно провести результативное лечение: каждый генотип по-разному чувствителен к антивирусным препаратам. Применяется два типа ПЦР:

  • качественный;
  • количественный.

Противовирусная терапия нуждается в постоянном контроле, чтобы своевременно скорректировать лечение, для этих целей также используется полимеразная цепная реакция.

 Как подготовится к сдаче анализа?

Заболевания различной этиологии, поражающие печень человека, называются гепатитами, которые подразделяются на вирусные и невирусные.

  • Вирусные гепатиты представляют собой инфекционную группу заболеваний.
  • К невирусным причисляют аутоиммунные, лучевые и токсические формы болезни.

Гепатиты бывают острыми, хроническими и диффузными, то есть затрагивающими целиком весь орган.

 Как подготовится к сдаче анализа?

Для точной диагностики гепатита, при наличии либо отсутствии характерной симптоматики, пациентам в обязательном порядке назначается сдача крови на антитела.

Алгоритм подготовки к сдаче анализа крови на гепатит достаточно прост

  • Предпочтительно сдавать кровь утром натощак. Это означает, что последний приём пищи перед анализом должен быть за 8 часов и более до него.
  • Есть вариант забора крови днём и вечером. В этом случае покушать следует за пять-шесть часов до исследования.
  • С утра и до момента сдачи крови нельзя пить ни чая, ни кофе, ни соков, можно пить только чистую питьевую воду.
  • За двое суток до исследования нужно исключить из рациона жирную и жареную пищу, а также алкогольные напитки.
  • Как минимум в течение часа до сдачи крови следует воздержаться от табакокурения.
  • Сразу после рентгенографических, ультразвуковых и инструментальных исследований, а также после массажа и физиотерапевтических процедур кровь сдавать не рекомендуется.
  • За 24 часа до взятия крови нужно прекратить приём лекарственных препаратов и не допускать больших физических нагрузок, в том числе интенсивного подъёма по лестнице и беговых упражнений. Эмоциональное перевозбуждение также противопоказано.
  • Перечень принимаемых больным лекарств, которые нельзя отменить, должен быть указан на бланке направления.
  • Четверть часа непосредственно перед анализом следует провести совершенно спокойно.

Утренние часы рекомендуются для сдачи анализов крови по той причине, что в течение дня показатели крови могут значительно изменяться!

Исследование крови на гепатит А проводится при первых признаках заболевания. Антитела к данному вирусу максимально концентрируются в крови в течение тридцати дней. Затем за следующие 12 месяцев их уровень постепенно снижается до нормального.

 Как подготовится к сдаче анализа?

Кровь на заражение гепатитом С нужно сдавать не раньше, чем через 6 недель с момента предполагаемого инфицирования!

Читайте также:  Как передается гепатит С – пути заражения и развитие заболевания

Виды исследования для определения вируса

Анализ крови на гепатит со 100% достоверностью определяется методом ИФА. ИФА – иммуноферментный анализ, основанная на прибавлении специфических антител или антигенов в исследуемую кровь, с последующим определением в ней ответивших комплексов антиген-антитело.

В случае положительного результата проводят дополнительное исследование крови – РИБА (рекомбинантный иммуноблоттинг). Кроме этого, существует метод ПЦР, который помогает с помощью цепной реакции восстановить РНК вируса гепатита С и определить количественный и качественный его состав. Анализ на выявление вируса гепатита С проводится во время беременности, перед проведением хирургического вмешательства, перед сдачей крови на донорство.

Запомните! Если был контакт с кровью или другими биологическими жидкостями больного, то в течение первых полгода анализ крови на гепатит может быть отрицательным.

Если в ходе исследования был найден вирус гепатита С в крови, то на этом исследование не заканчивается? Ведь показатели крови меняются при наличии инфекции в организме. Какие анализы нужно сдавать в качестве дополнения?

Виды исследования для определения вируса

После положительного результата специалистом будет назначено:

  • развернутый общий анализ крови;
  • биохимический анализ крови;
  • определение генотипа вируса;
  • УЗИ органов брюшной полости (в частности, печени);
  • определение других видов гепатита;
  • кровь на ВИЧ-инфекцию;
  • гистология печени;
  • при необходимости исследования щитовидной железы и аутоиммунных болезней.

Изменения показателей венозной крови — индикатор патологического процесса

Общий анализ крови при гепатите С будет отличаться от лиц, не имеющих такую патологию. Какие показатели меняются при заболевании? Снижение количества лейкоцитов будет указывать на наличие хронического инфекционного заболевания, у лиц, принимающих противовирусные комплексы, отмечается повышение показателей СОЭ и значительное понижение нейтрофилов.

Сроки действительности

Анализ на гепатит проводят в два этапа. Сначала делают ИФА. Если тест показал положительный результат, то делают ПЦР. ИФА может ошибаться в 8 % случаев, то есть ложноположительный и ложноотрицательный результат не исключается.

READ Диагностика сыворотки крови — норма триглицеридов

На точность ИФА могут повлиять наличие злокачественных новообразований, сифилиса, иммунных нарушений. ИФА не сможет выявить вирус, если с момента заражения прошло мало времени.

На исследование берут кровь из вены. К сдаче биоматериала нужно готовиться – минимум за 8 часов прекращают курить, употреблять алкоголь и принимать пищу.

Видео:

В результатах анализа должно быть обозначение обнаруженных антител.

Сколько времени будет готовится ИФА? Сроки зависят от загруженности лаборатории. В платных медучреждениях готовый результат выдают уже через два-три дня, в бесплатных исследование будет готово максимум через неделю.

Результат полимеразной цепной реакции всегда действительный. Исследование проводят уже 15 лет, и за это время оно заслужило репутацию безошибочного теста.

Сколько времени действителен анализ ПЦР? Считается, что результат достоверен не более чем в течение полугода.

Читайте также:  Дешевые аналоги эссенциале список с ценами в рублях

Люди, входящие в группу риска по гепатиту, должны пересдавать анализ через каждые 6 месяцев – это помогает обнаружить патологию на раннем этапе, когда лечение максимально эффективно.

Ложный результат

Расшифровка анализа не менее важна, чем сама процедура. Количественный ПЦР может быть ложным только в результате ошибки, так называемого человеческого фактора. По различным данным вероятность получения ложного результата анализа составляет около 5%. Порча биологического образца возможна при транспортировке и неправильном хранении.

Также имеет место загрязнение рабочего места лаборанта и ошибки во время взятия крови для анализа.

От пациента в данном случае мало что зависит. Но следует уделить максимум внимания выбору лаборатории, в которой будет проводиться исследование. Сегодня любой человек может ознакомиться с отзывами о медицинских учреждениях в интернете и составить мнение о компетентности и профессионализме сотрудников лаборатории. Оснащенность современным оборудованием и положительная реакция людей снижает шансы на получение ложного результата.

Согласно медицинской статистике в 30% случаев заражения гепатитом типа С иммунная система человека может самостоятельно побороть заболевание без использования медицинских препаратов. В остальных 70% случаев без врачебного вмешательства болезнь перетекает в хроническую форму и остается навсегда, постепенно разрушая печень и сокращая длительность жизни человека. Количественный анализ на гепатит С с расшифровкой позволяет, как диагностировать заболевание в начальной стадии, так и отслеживать периоды обострений хронической формы заболевания.

(Пока оценок нет)

Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?

Любой человек с целью профилактики или при возникновении подозрений на заражение гепатитом может обратиться к терапевту или гепатологу, чтобы сдать анализ крови на маркеры вирусных гепатитов. Также можно сделать это анонимно в частной лаборатории.

Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?
Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?

Заподозрить наличие вируса гепатита в организме можно по следующим клиническим симптомам:

Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?
Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?
  • постоянная субфебрильная температура тела;
  • диспепсические расстройства: тошнота, рвота;
  • отсутствие аппетита;
  • появление кожного зуда;
  • боли в животе;
  • склонность к кровотечениям;
  • постоянная усталость, общая слабость, усиливающаяся к вечеру;
  • усиление пигментации кожи;
  • потемнение мочи;
  • безосновательная потеря веса.
Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?
Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?

Все перечисленные признаки являются обязательным поводом для проведения анализа крови на RW, ВИЧ и гепатит. Если расшифровка анализа крови на маркеры вирусных гепатитов даст положительный результат, больному будет проведено дополнительное обследование и назначена грамотная терапия.

Когда необходимо сдавать анализ на гепатит?

Правила проведения анализа

Если говорить о правилах сдачи данного анализа, то строгих и сложных предписаний по поводу этого нет, но имеются определенные ограничения:

  1. Анализ проводится утром. Перед этим запрещается употреблять пищу, напитки за несколько часов до взятия образца биоматериала.
  2. Основные медицинские инструменты, которые применяются при осуществлении данного лабораторного исследования – вата, скарификатор и спирт.
  3. Для обследования используется капиллярная кровь, которая берется из пальца. В некоторых случаях, по указаниям специалиста, могут брать венозную кровь.
  4. Затем производится расшифровка анализа. Существуют также особые гематологические анализаторы, при помощи которых возможно определять до 24 параметров крови автоматически. Подобные приборы выводят распечатку с расшифровкой исследования почти сразу после взятия крови.

Срок выполнения результатов анализов

Срок выполнения анализов на кровь (общий анализ крови) составляет от 1 до 2 рабочих дней. В сложных формах анализов с биохимическим исследованием (биопсия ткани) поражённого участка печени, диагностический срок и постановка правильного диагноза может быть до 8 дней. В отдельных случаях, анализ крови может составлять – 5-10 дней (анализ на гормоны), во всех остальных случаях общего анализа, биохимии, анализа крови на сахар, выявление паразитов и различные инфекции – не более 7 – 8 дней.

Как правило, анализы можно сдать быстрее, а вернее получить результат анализов, обратившись в специализированные лаборатории. За быстрый экспресс метод выявления гепатита той или иной формы, другого заболевания, нужно потратить больше средств за срочность сложного анализа.

Виды анализов на сифилис

Этот вид исследования часто назначают вместе с анализом на гепатит. Существует несколько способов выявления сифилиса, в том числе и в домашних условиях. Экспресс-тесты доступны для проведения исследования дома. Результат будет готов не позднее, чем через 30 минут. Лабораторные методы:

  • Иммунной флюорисценции – это наиболее точный способ выявления инфекции.
  • Иммуноферментный – позволяет определить разных классов антитела в качественном и количественном выражении.
  • Иммобилизации трепонем – один из самых чувствительных способов обнаружения определенных трепонем. С его помощью диагностируют инфекцию при отсутствии признаков заболевания.
  • Пассивной агглютинации – способ результативен на любой стадии патологии за исключением первых четырех недель проникновения возбудителя.

Независимо от того, каким способом было проведено исследование, итоги можно получить через два-три дня, а срок годности анализов на сифилис от трех месяцев до года.

Как выполняют подсчет вирионов

Во время количественной ПЦР возбудителя идентифицируют путем обнаружения РНК в плазме крови. Это возможно за счет удвоения участка нуклеиновой кислоты вируса в среде фермента РНК-полимеразы. Во время анализа копируются (амплифицируются) только определенные участки генома.

Подсчет количества РНК вируса гепатита осуществляют в 3 этапа:

  1. Выделение генетического материала. Чтобы очистить вирусную РНК от крови и белковых включений, биоматериал пропускают через сорбенты, отмывают в растворе, центрифугируют, а потом обезвоживают. В результате остается осадок с вирусными частицами, который растворяют в специальной жидкости. На выходе получается РНК вируса гепатита в элюенте.
  2. Амплификация. Анализ выполняется в приборе-термостате, в котором периодически подогревают и охлаждают пробирки. При одном исследовании делают до 35 циклов, состоящих из 3 фаз: денатурация (разрушение) РНК, отжиг и синтез нуклеиновых кислот матричной цепи. За несколько десятков циклов в пробирке образуется множество фрагментов РНК, достаточное для подсчета количества генетического материала.
  3. Электрофорез. Пробирку с копиями вируса гепатита помещают в агарозный гель. Образец подключают к источнику тока, под действием которого фрагменты РНК разделяются. Благодаря электрофорезу копии нуклеиновых кислот становятся различимыми в свете ультрафиолета. Затем с применением специального оборудования подсчитывают количество РНК вируса.

В настоящее время для определения уровня виремии все чаще проводят ПЦР-диагностику в реальном времени (Real-Time PCR). В отличие от стандартного анализа, в образец крови вводят раствор с флуоресцентными метками. Благодаря этому удается подсчитать количество амплифицированной РНК ВГС в реальном времени после каждого цикла.